Candida glycerinogenes基因组大片段缺失菌的构建及表征

通过基因组简化，可以获得代谢背景较低、更适合于工业生物技术的底盘细胞。产甘油假丝酵母是一株抗逆性很强的工业菌株。它的基因组被简化以获得更好的底盘细胞。本文以CRISPR／Cas9为工具，对C.glycerinogenes基因组进行了非必要的DNA大片段缺失，剔除了25和50个kb片段，并对缺失细菌的耐受性和发酵特性进行了研究。结果表明，片段缺失菌株的抗逆性没有显著变化。7.8 K细菌的生物量在30时下降了20%，7.8kb和25kb细菌的生物量在42时下降了20%。在发酵过程中，每个缺失菌株的生物量下降了20%，其中7.8株kb菌株表明，发酵初始生物量增加了14%，单位细胞甘油产量增加了22%，还原力相关基因G6PD和6pgdh分别增加了10倍和29倍，NADP＋在NADPH／的比例增加了100%。结果表明，上述非必需的DNA大片段缺失对C.glycerinogenes的耐受特性没有显著影响，但会导致生物量的减少和单位细胞甘油产量的增加。由于基因表达水平的差异，缺失菌株可能与野生菌株在性状上有所不同。本研究是对genesC.glycerino genesCRISPR／Cas9系统的潜在挖掘，有助于推动这一非模型工业菌株的底盘加工和应用。