构建髓系细胞特异性Clcn7突变骨硬化症小鼠模型和表型研究

目的构建髓系细胞特异性Clcn7－G763R突变型骨硬化小鼠模型并研究其表型。方法用重组酶转基因小鼠溶菌酶M启动子（LysMcre）构建条件敲除Clcn7基因p．G763R错义突变小鼠并繁殖。最后，获得了髓系细胞特异性Clcn7－G763R突变型骨硬化小鼠。Micro的CT用于分析不同基因型小鼠的骨微结构差异，HE染色用于观察骨组织形态学的变化。诱导原代成骨细胞，采用实时荧光定量PCR技术检测破骨细胞分化成熟相关基因的表达水平。通过骨吸收陷窝试验观察破骨细胞的功能。结果4周龄时，纯合突变小鼠体重下降[（12.0001.666）g vs.（15.6302.314）g，P=0.021]，股骨长度缩短[（1.1600.096）cm vs.（1.3000.082）cm，P=0.037）]。Micro的CT发现纯合突变小鼠的骨密度在4周龄时显著高于野生型小鼠[（0.7530.002）g/cm2 vs.（0.1430.002）034）g/cm2，P=0.003]，而杂合突变小鼠的骨密度在8周龄时显著增加[（0.2360.021）g/cm3 vs.（0.1800.020）g/cm3，P=0.030]。HE染色发现纯合子突变小鼠消失，松质骨骨小梁的数量显著增加，软骨肥大区域扩大。与野生型小鼠相比，杂合子突变小鼠在骨小梁的数量有所增加。在体外，与野生型小鼠相比，杂合子突变小鼠的破骨细胞数量没有显著变化（P=0.358），但破骨细胞面积增加[（3.5901060.911106）m2 vs.（1.3521060.260106）m2，P=0.043]。骨吸收陷窝的结果表明，破骨细胞的功能降低，而与破骨细胞分化和成熟相关的基因NFATc1、c-fos在Ctsk和Acp5的表达水平没有显著变化。结论本研究成功构建了骨髓细胞特异性突变小鼠。突变小鼠破骨细胞功能受损，骨量显著增加，股骨变短，为后续机制研究和治疗探索提供了工具。