桑花叶萎缩类病毒基因组核酶活性及其对桑树侵染性的研究

桑花叶萎缩类病毒的基因组（MM·DVd）由单链圆形小分子RNA组成。根据预测，二级结构中可能存在锤头核酶（Hammerhead核酶，HH）和疑似发夹状核酶（Hairpin核酶，HP），但对核酶活性的研究仍然缺乏。在这项研究中，核酶活性和自切割位点通过体外自切割和2,3-二聚体鉴定。将一对碱基添加到发夹核酶Loop1中，合成突变核酶MM·DVdHP？，比较了其与HPMM·DVd的活性差异，并分析了MM·DVd对正常未感染病毒和桑花叶卷叶病相关病毒（罗尔相关病毒、Mulberry、mosaic、leaf、MML、RaV）的感染情况。体外自切割结果表明，所有核酶均成功自切割，产生具有核酶活性的相应单体。2,3-环磷酸基的测序结果表明，Aristole DVD HH的切割位点位于AUC，Aristole DVd-HP的切割位点位于ACA，在腺苷酸化连接分别在7位和302位连接到C和a之后。定量PCR的研究结果表明，MM·DVd在HP的得分高于MM·DVd？，显示MM·DVd的HP？与MM·DVd相比，出现了更多的分裂，其活性更高。感染性实验结果表明，MM·DVd在桑树（-）中未检测到，而MM·DVd在所有桑树（MML-RaV）样本中均检测到，表明MM·DVd可感染桑树（RaV，MML），这与satRNA的特征相似。