miR-142-5p靶向调控RPN2对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响及其机制

目的探讨RNA1425p（miR－142－5p）靶向调节核糖蛋白2（rpn2）对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法体外培养人胶质瘤细胞系U251、U87、T98G和正常星形胶质细胞株HA1800。RT－qPCR法检测到miR-142-5p和RPN-2的表达。在生物信息学软件TargetScan7.2的帮助下，预测了miR－142－5p和RPN2之间的靶向结合位点，并通过双重荧光素酶报告基因实验进行了验证。将生长状况良好的对数生长期15代人脑胶质瘤细胞随机分为对照组、miR－142－5p组、rpn2组和miR－142－5p＋RPN2组。对照组未转染。分别用miR－142－5p或（和）rpn2过表达质粒转染miR－142－5p组、rpn2组和miR－142－5p＋RPN。MTT法法检测各组细胞增殖活性，Transwell侵袭试验检测各组侵袭能力，Western　blotting法检测Wnt／－catenin信号通路相关蛋白catenin、PGSK3-、GSK3-、e-simaqian、n-simaqian和Vimentin的表达。结果U251、U87和T98G细胞miR－142－5p的相对表达显著低于HA1800细胞，RPN2mRNA的相对表达显著高于HA1800细胞（P<0.05），U251、U87、T98G细胞miR－142－5p和RPN2mRNA的相对表达显著高于表达量（P>0.05）。选择miR－142－5p相对表达量最低、RPN2号mRNA最高的人脑胶质瘤U251细胞进行后续实验。生物信息学在线软件TargetScan7.2预测，RPN2号在mRNA的3’非编码区的第93~99个基地与miR的相似-142-5p靶向绑定网站。双重荧光素酶报告基因实验证实miR－142－5p可以抑制rpn2的表达。与对照组相比，Aristole-142-5p组细胞增殖活性在48小时和72小时显著降低，rpn2组细胞增殖活性显著升高（均P<0.05）。与miR－142－5p组相比，rpn2组的细胞增殖活性在48小时和72小时显著增加（均P<0.05）。与rpn2组相比，miR－142－5p＋RPN2组细胞增殖活性在48小时和72小时显著降低（均P<0.05）。与对照组相比，Aristole-142-5p组的侵袭性细胞数量显著减少，rpn2组的侵袭性细胞数量显著增加（均P<0.05）。与miR－142－5p组相比，RPN2组和miR－142－5p＋RPN2组的侵袭性细胞数量显著增加（均P<0.05）。与rpn2组相比，miR－142－5p＋RPN2组的侵袭性细胞数量显著减少（均P<0.05）。与对照组相比，Aristole-142-5p组中catenin、P-Mordova 3-、n-simaqian和vimentin的相对表达显著降低，E-cadherin的相对表达显著增加（均P<0.05），E-cadherin的相对表达显著降低（均P<0.05）。与rpn2组相比，miR－142－5p＋RPN2组－catenin、p-GSK3-、n-simaqian和波形蛋白的相对表达显著降低，E-钙粘蛋白的相对表达显著增加（均p<0.05）。结论miR－142－5p能抑制rpn2的表达，抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭。其机制可能与Wnt/-Catenin信号通路的调控有关。