小鼠脊髓源原代星形胶质细胞与小胶质细胞的同步培养及鉴定?

目的建立一种简单有效的分离、纯化和培养脊髓源原代星形胶质细胞和小胶质细胞的方法。方法在显微镜下解剖胎鼠脊髓，将其切成块。在机械吹扫和自然沉淀后，制备细胞悬浮液并接种到多聚赖氨酸涂层的培养瓶中。混合神经胶质细胞与含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养，星形胶质细胞和小胶质细胞通过恒温轨道振荡结合通道除杂获得。用光学显微镜观察纯化前后的细胞形态，用免疫荧光法检测细胞标记物GFAP（星形胶质细胞）和CD11b（小胶质细胞）。结果通过一次手术，同时获得了两种来自脊髓源的胶质细胞。所得细胞形态正常，活力良好。在1～2天内，用培养瓶底部覆盖，细胞阳性率达97%以上，细胞阳性率达97%以上。免疫荧光法鉴定了P1、星形胶质细胞和P0小胶质细胞的绿色荧光阳性细胞和细胞核。结论在恒温轨道振动台上摇动，结合传代除杂，可在短时间（6～9天）内获得两种高纯度胶质细胞。