加载MAGE-A10/hβD-2双基因溶瘤病毒对膀胱癌细胞增殖及肿瘤生长的影响

目的研究溶瘤病毒SG502－MAGE－A10－hD－2负载黑色素瘤相关抗原A10（MAGE－A10）和人类防御素2（hD-2）基因对膀胱癌肿瘤增殖和生长的影响。方法构建负载MAGE－A10和hD－2基因的溶瘤病毒SG502－MAGE－A10－hD－2，采用半组织培养感染剂量法测定病毒滴度。CCK－8法测定溶瘤病毒SG502和SG502－MAGE－A10－hD－2对T24和MB49细胞系增殖的影响。SG502组加入SG502-病毒，SG502－MAGE－A10－hD－2组加入SG502－MAGE－A10－hD－2-病毒，对照组加入PBS。分别培养24、48、72和96小时。用MB49细胞构建C57BL／6小鼠皮下移植瘤模型。肿瘤生长至100~150~3后，将18只小鼠按随机数字表法分为对照组、SG502组和SG502－MAGE－A10－hD－组，每组6只。对照组给予50L生理盐水进行瘤内多点注射，SG502组给予含有2108个病毒颗粒的SG502-病毒50l生理盐水溶液进行瘤内多点注射，SG502－MAGEA10－hD－2组给予含有2108个病毒颗粒的SG502－MAGE－A10－hD－2-病毒50l生理盐水溶液进行瘤内多点注射，每周两次。瘤内注射5周后，测量肿瘤体积、MAGE－A10和hD－2蛋白的表达、Ki67的表达以及血清中TNF和干扰素的含量。结果溶瘤病毒SG502－MAGE－A10－hD－2成功构建，纯化后病毒滴度为2.051010pfu/ml。SG在T24和MB49细胞抑制率的每个时间点上都有显著差异502组和SG502－MAGE－A10－hD－组（P<0.05）。与MB49细胞抑制率相比，差异有统计学意义（P<0.05）。与SG502组、24、48、72和96小时的T24组和MB49细胞抑制率组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。Aristole 502组和SG502－MAGE－A10－hD－组在每个时间点的肿瘤体积有显著性差异（P<0.05），SG502组组和对照组在14、21、28、35和42天的肿瘤体积有显著性差异（P<0.05），SG502－MAGE－A10－hD－组和Aristole 502组在14、21、28、35和42天的肿瘤体积有显著性差异（P<0.05）。SG502组肿瘤重量低于对照组，SG502－MAGE－A10－hD－2组肿瘤重量低于sg502组，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。SG502组肿瘤坏死因子（TNF）和干扰素（IFN）的水平高于对照组，SG502－MAGE－A10－hD－的TNF和干扰素水平高于sg502组（P<0.01）。干预5周后，SG502－MAGE－A10－hD－组2小鼠的肿瘤中表达MAGE－A10和hD－2蛋白，而对照组和sg502组小鼠中不表达MAGE－A10和hD－2蛋白。Aristole 502组和SG502－MAGE－A10－hD－组Ki67的表达低于对照组（P<0.01）。结论SG502－MAGE－A10－hD－2能抑制T24和MB49细胞的增殖，抑制MB49荷瘤小鼠的肿瘤生长，刺激小鼠体内TNF和IFN的分泌。