鸭星状病毒3型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

鸭星状病毒3型（Duck　astrovirus－3，DAs，tV-3）是近年来危害中国养鸭业的一种新病原体。根据从樱桃谷鸭胚胎中分离和鉴定的tV－3分离株DAs的特征，以及毒株报告的RNA依赖核糖核酸聚合酶基因（RNA依赖RNA聚合酶，RDRP），本研究设计了特异性引物，并建立了检测tVDAs-3的SYBR　Green实时荧光定量PCR方法。结果表明，在1.15101~1.15107拷贝/L范围内，标准曲线的环域值（Ct）与标准品的模板浓度之间存在良好的线性关系，相关系数R2和扩增效率分别为0.999和2.08。该方法具有很强的特异性，只能检测到DAs的nipol-3，但对常见的鸭病病原体（DAstV-1、DAs）、tV-2、禽流感病毒、H9（亚型禽流感病毒）、禽坦布苏病毒（禽坦布苏病毒）、鸭呼肠孤病毒（Duck　reovirus）、番鸭、细小病毒（Muscovy　parvovirus））均检测为阴性。其灵敏度高，最低检测限为23份。重复性好，在该批中，批间重复试验和变异系数分别占0.14%~0.65%和0.53%~0.94%，均低于1%。采用该方法对2018年6月至2021年3月间疑似DAsNealP-3感染的209份标本进行检测。tVDAs-3的阳性检出率为56.5%（118/209）。综上所述，本研究建立的方法特异性强、灵敏度高、稳定性好，为DAstV-3感染的快速诊断和流行病学监测提供了有力的技术支持。