玉米谷氨酰胺酶基因在毕赤酵母中表达条件的优化

为了确定玉米谷氨酰胺转氨酶基因在毕赤酵母的最佳诱导和表达条件，将构建的重组表达载体pPIC9K－TGZ经Sac　I线性化并转移到巴斯德毕赤酵母的GS115。阳性克隆经抗生素Zeocin筛选，聚合酶链式反应扩增验证，甲醇诱导。通过正交试验确定工程菌的最佳表达条件：培养基BMMY表达，诱导时间96h，pH值初始表达6.0，OD600nm值初始诱导4.0，诱导温度24，甲醇添加量0.6%（体积分数），甲醇流动添加时间间隔12h/次，诱导48小时后，每24小时加入1g/l甘油。培养基和上清的最高酶活性为7.51U/ml。