嵌合抗原受体T细胞靶向LMP1抗原治疗EB病毒阳性淋巴瘤的功能研究

目的制备靶向LMP1抗原嵌合抗原受体T细胞（car-T细胞），并研究其对EB病毒（EBV）阳性淋巴瘤的免疫治疗效果。方法采用分子克隆技术构建第二代LMP1-CAR表达质粒。用慢病毒包装系统包装病毒，感染人T细胞，获得LMP1 car-T细胞。体外实验证实了LMP1 car-t细胞对感染EBV的LMP1阳性淋巴瘤细胞的特异性细胞毒性作用。结果LMP1蛋白在EBV阳性淋巴瘤细胞表面表达。第二代LMP1-CAR-慢病毒载体成功构建，感染人类T细胞并获得LMP1 car-T细胞。感染率在80%以上。LMP1 car-t细胞能特异性杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞。效靶比在41℃共培养48小时，与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养5小时后，LMP1CAR－T细胞处理组CD107a＋T细胞的比例显著高于Vector－T细胞组[（13.252.94）%vs.（1.550.05）%，T=3.972，P=0.017]，LMP1CAR－T细胞组CD69＋和CD25＋T细胞比例显著高于Vector－T细胞组[（7.400.41）%对（3.480.47）%，T=6.268，P=0.003.（73.004.73）%对（57.672.60）%，T=2.842，P=0.047]，激活效应增强。与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后，LMP1分泌增加，高于Vector－T细胞组[IFN-（70373）ng/L vs.（42287）ng/L，t=2.478，P=0.068。TNF-（21535）ng/L vs.（1252）ng/L，t=2.536，P=0.064]。结论本研究证实LMP1蛋白可在EBV阳性淋巴瘤细胞表面特异性表达。成功构建LMP1CAR慢病毒载体并感染人类T细胞，成功获得LMP1CAR－T细胞。体外实验表明，与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后，LMP1 car-t细胞具有增强的脱颗粒效应、活化效应、高效分泌细胞因子和特异性杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞的作用，具有潜在的临床应用前景。